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单分子检测是一项重要的技术，提供了更多的见解隐藏在更传统的“批量”成像方法的细胞机制。它也被用作超分辨率的基础，以提高细胞内成分的分辨率，研究蛋白质和膜的相互作用和动力学，以及单分子FISH。
多年来，Andor的iXon emccd已经成为生物物理实验室检测的金标准。经过改进和完善，最新的iXon emccd继续被证明是最敏感的探测器技术，用于最关键的测量。
单分子研究被广泛应用于许多科学领域，以获得对单个生物分子的理解，这在传统的集成成像实验中是不可能的:
| TIRF显微镜 | 烦恼 | 基于本地化的超分辨率 | 荧光相关光谱(FCS) | |
| 典型的应用万博电脑网页版登录 | ✅蛋白质-膜相互作用的实时分析 ✅膜贩运动态 ✅囊泡和核内体 ✅远端和胞吐 ✅单蛋白贩卖 |
✅蛋白质与蛋白质的相互作用 ✅共同定位研究 ✅蛋白质结构分析 ✅蛋白质动力学 |
✅分解细胞内结构 ✅组织中分子的空间组织 ✅单分子FISH ✅多路原位成像 ✅转录组 |
✅确定扩散速率 ✅研究结合和分离率 ✅检测蛋白质构象变化 ✅细胞质和细胞间室的浓度测量 |
| 技术概述 | 全内反射荧光(TIRF)显微技术利用倏逝波的光学特性，在有限的深度内提供高分辨率。适用于研究细胞膜边界上许多重要的动态过程。 了解更多TIRF． |
Förster共振能量转移(FRET)使接近两个荧光团精确确定。因此，它被用来推断FRET标记的生物分子之间的距离和相互作用关系。 了解更多烦恼． |
荧光团发射的定位是许多超分辨率方法的基础，如STORM, PALM和DNA Paint。这些技术用于解析低于经典分辨率极限的细胞内结构，并提供组织内标记生物分子的空间信息。 了解更多转录组或超分辨率． |
荧光相关光谱(FCS)不同于其他技术，因为它是一种基于荧光光谱的技术，提供单分子水平的时间信息。荧光的波动可用于确定反应和扩散速率的信息。 了解更多FCS． |
EMCCD和背光sCMOS相机广泛适用于单分子检测的主要技术，例如共聚焦、TIRF、FRET或基于超分辨率的单分子定位。每种技术都有自己的好处，那么哪一种最适合呢?下面的指南提供了不同相机模型与各种实验要求的比较
| 背光EMCCD相机 | 背光式sCMOS摄像机 | |||
| 应用程序需求 | iXon Life/ Ultra 888 | iXon Life/ Ultra 897 | Sona 4.2 b - 6 | 4.2 Sona b-11 |
| 捕捉最弱的信号 |  |
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| 高传感器分辨率1 |  |
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| 图像一个宽的视野 | |
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| 高速成像2 | |
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| 高动态范围 | |
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| 长期暴露适宜性3. | |
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| 定量精度高 | |
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| 总结 | 当需要最大视场的终极灵敏度时。 | 当需要最高的灵敏度和广泛的视野不是优先考虑。 | 高度灵活的成像解决方案，为更高的信号水平提供广阔的视野和最高的速度。 | 为了在更高的信号水平上平衡高灵敏度和视野。 |
1光学显微镜的有效图像分辨率由显微镜物镜(分辨率=λ/2NA)和所使用的技术确定。较小的像素尺寸将在较低的客观放大倍数下满足或超过奈奎斯特采样，并可能有助于基于定位的实验、超分辨率或反褶积。
2EMCCD相机可以通过将传感器裁剪到更小的视野以更高的帧率运行。虽然在纸上速度更快，但只有在每个曝光周期的信号水平合适时，sCMOS上的高速才可能实现。
3.sCMOS相机最适合短曝光。由于极低的暗电流，EMCCD相机可用于将曝光延长到几分钟。Ultra模型也受益于传统的CCD模式。
还是不确定要选哪台相机，请联系我们的应用专家。
请看看下面的一些单分子成像网络研讨会和在学习中心可用的技术文章。
| 作者 | 标题 | 杂志 | 一年 |
| Janett Göhring等 | 通过定量单…分析t细胞受体施加的力 | 自然 | 2021 |
| Tanmay Chatterjee等人 | 单个蛋白质分子的直接动态指纹和数字计数… | PNAS | 2021 |
| Sung Hyun Kim等 | 用单分子编码DNA条形码中的多个虚拟信号 | ACS | 2021 |
| Hamidreza Heydarian等人 | 三维粒子平均与定位大分子对称性检测 | 自然通讯 | 2021 |
| Huong Thi Thuy Nguyen等 | 基于tirf超分辨率的单dna分子碱基对距离研究 | 韩国化学。社会 | 2020 |
| Francesca Cella Zanacchi等人 | 利用成像不变量在超分辨率下定量蛋白质拷贝数 | 生物物理期刊 | 2019 |
| Jason Otterstrom等人 | 超分辨率显微镜揭示组蛋白尾乙酰化如何影响DNA… | 核酸研究 | 2019 |
| Viktorija Globyte等人 | Cas9内切酶的单分子FRET研究 | 科学指引 | 2018 |
| 杨晨等 | 单分子FRET揭示了类动力学MxA的构象动力学 | 自然通讯 | 2017 |
| Florian Schueder等人 | 利用旋转磁盘对整个细胞进行多路3D超分辨率成像… | 自然通讯 | 2017 |
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