研究人员使用图像分析来更好地了解中心体成熟

通过双胸腺胺块同步HeLa细胞，并在抗ofic剂（PCNT）免疫染色和PCNT Smfish之前用DMSO媒介物（对照），雌激素，哈灵顿或嘌呤霉素处理。对于每种条件，显示了代表性共聚焦图像和PCNT mRNA分布的定量。研究人员通过测量3D渲染PCNT Smfish信号和最近的中心体中心之间的距离来量化细胞中PCNT mRNA的分布。然后将mRNA的分数与到最近的中心体的距离的函数绘制为三个生物学重复的平均值（实线）±95％CI（阴影）。请注意，PCNT mRNA在哈灵顿或呼毒素治疗后从中心体移开，但与对照相似，在雌激素治疗后保持靠近中心体。由加利福尼亚大学戴维斯分校的Li-en Jao提供。

由加利福尼亚大学戴维斯分校的Li-en Jao领导的研究人员正在研究细胞如何通过称为Centrosome成熟的过程在分裂之前快速扩展其中心体。当此过程无法正常工作时，它可能导致基因组不稳定性和癌症中不受控制的细胞分裂。使用伊玛里斯软件和安多蜻蜓共聚焦显微镜系统，他们对中心体如何组织细胞分裂过程中的微管有了新的发现。

中心体是无膜的微米尺度，自组装细胞器。在细胞分裂之前，中心体“成熟”，以使其微管 - 组织活动最大程度地支持纺锤体微管的组织。

在这项新研究中，研究人员专注于蛋白质包质蛋白，该蛋白质通过帮助募集其他蛋白质来启动中心体成熟。他们想进一步了解细胞如何在不到几分钟内生产和输送大量大蛋白质到中心体。

检测弱信号

为了更多地了解细胞中周围环肽的生产方式和何处，研究人员将单分子RNA原位杂交（Smfish）和抗体染色结合在一起，以检测丁香蛋白蛋白RNA和新合成的围质蛋白。RNA和新合成蛋白的共定位揭示了要翻译的精确RNA分子。

研究人员使用Andor Dragonfly System（一种旋转的圆盘共聚焦显微镜）在培养的人类细胞中成像了丁香蛋白RNA和蛋白质，该系统融合了具有高灵敏度相机的微丝方共聚焦扫描仪。Jao说：“蜻蜓系统提供了高灵敏度和共同点，以检测弱的S​​mfish信号。”“这也使我们能够以高灵敏度和分辨率对包质蛋白mRNA和蛋白质进行成像。”

接下来，研究人员使用Imaris来量化丁香蛋白RNA分子如何根据单细胞水平的中心体分布。他们首先使用Imaris将蛋白质信号转换为表面和mRNA信号中的3-D RNA分布开始，并将mRNA信号转换为每个共聚焦Z-stack的反驳图像中不同尺寸的斑点。然后，他们通过将蛋白质围质蛋白信号的表面放在原始图像上，并使用iMaris中的统计函数来在拟合体积内获得原始图像的强度之和，从而量化了中心蛋白蛋白的强度。

包中心素一次建造和运输

总体而言，图像分析表明，在有丝分裂过程中，腹膜蛋白蛋白在共晶体中均可募集到中心体。这意味着通过使用RNA分子作为模板来构建蛋白质和核糖体以正确的顺序组装蛋白质和核糖体，同时构建和运输丁香蛋白。

研究人员计划通过使用蜻蜓系统和Imaris继续进行这一研究，以找出细胞坐标如何将围环蛋白共靶向中心体，并在中心体成熟期间募集其他中心蛋白。

研究人员使用Smfish和双重免疫荧光（IF）来区分新合成和全长包中心蛋白（PCNT）蛋白（A）。（b）针对PCNT蛋白的N-和C末端的PCNT Smfish和抗PCNT免疫染色。假定的主动翻译位点由PCNT N-TERM IF和PCNT SMFISH标记，而不是PCNT C-TERM IF（顶部面板）标记。在嘌呤霉素治疗后，如果信号不再与PCNT Smfish信号共定位，则PCNT N期限，这表明那些PCNT n-term如果RNA上的信号代表新生的PCNT PCNT多肽。橙色盒子显示出标记为虚线橙色盒子的区域的较高对比度。（C-D）使用iMaris将PCNT蛋白和PCNT mRNA信号渲染为“表面”和“ Spot”的示例分别为“表面”和“斑点”。（e）从中心体中心1到3 µm半径之间的PCNT Smfish信号被定量是否存在抗PCNT n-term，如果有或没有短毒素处理的信号。由加利福尼亚大学戴维斯分校的Li-en Jao提供。

研究论文：Sepulveda G，Antkowiak M，Brust-Mascher I，Mahe K，Ou T，Castro nm，Christensen LN，Chemung L，Jiang X，Yoon D，Yoon D，Huang B，Jao LE。2018。靶向靶向的共同翻译促进脊椎动物中心体成熟期间PCNT的中心体募集。Elife。PII：E34959。doi：10.7554/elife.34959。