先进的显微镜应用程序 - FRET概述万博电脑网页版登录

烦恼（有时被称为Förster共振能量转移）能够确定两种荧光团的接近。FRET是许多人之一单分子技术如Tirf.，近年来越来越受欢迎的SIM和超级分辨率本地化。共振能量转移仅发生在10nm内的非常短的距离，并且涉及从供体荧光团的激发状态能量直接转移到受体荧光团，作为从供体的荧光发光衰减的替代方案。在转移能量时，受体分子进入激发状态，从中衰减，使其自表示（总是比受体发射的比较较长的波长）。通过激动施主然后监测相对捐赠者和受体排放，依次或同时地，可以确定何时发生FRET和效率。

可以使用荧光团特异性标记感兴趣的生物分子和距离条件烦恼是大多数生物分子（1-10nm）的直径的顺序。因此，这意味着可以利用FRET来确定这些标记的生物分子（通常蛋白质）中的何时，地点，其中两种或更多种在其生理周围环境中相互作用。对应于显微镜图像内的特定位置的FRET信号提供额外的距离精度超过光学显微镜的光学分辨率（〜0.25mm）。除了空间接近，对于举办的高效褶皱，FRET染料对还必须具有施主的励磁光谱的显着重叠，具有受体的吸收光谱。这是构成FRET的实验悖论之一的特征：

• FRET对的光谱轮廓不能如此分开，我们的重叠差，
• 然而，人们希望避免两个成像通道之间的“交叉谈话”，即，理想情况下，施主排放过滤器组必须仅收集来自供体的光，并且没有来自受体，反之亦然。

在实践中，这可以使用短带通滤光器来实现，所述短带通滤波器仅收集来自施主发射的较短波长侧的光和受体发射的较长波长侧。这可以在典型的曝光期间将来自供体和受体的光子通量有所限制，特别是当我们记住这些测量在减少激励力的条件下最好进行，这样我们就不会加速漂白率。这意味着需要超敏感的探测器FRET实验。
示例FRET DYE对包括：

• BFP-GFP.
• CFP-DSRED.
• BFP-GFP.
• CY3-CY5
• CFP-yfp.
• ALEXA488-ALEXA555
• ALEXA488-CY3
• ALEXA594-ALEXA647
• Fitc-Tritc.
• 意见（iii）-fluorescein
• DISBAC4（3）-CC2-DMPE（电压敏感FRET对）

CFP-YFP FRET染料对的轮廓如下所示：

CFP-YFP FRET对的吸收和发射光谱谱。

安德尔的IXON EMCCD相机，是否作为关键组成部分蜻蜓活细胞共焦成像平台或者在另一个共聚焦系统中是既有既熟悉的误操作态解体解决方案。EMCCD启用高分辨率，高信噪比（S / N）的确定FRET互动在整个成像区域或细胞的体积中，并且有助于解决当使用窄带滤波器时存在的低光子水平。当结合仔细选择过滤器集时，它确保了FRET数据的高完整性。由于EMCCDS克服了任何读出速度的噪声地板检测限，因此可以高精度地动态地遵循分子相互作用。此外，通常可以减少激发功率意味着光毒性和光漂白效果最小化，从而可以遵循更长的时间更长的分子相互作用。有关单分子研究检测器选择的更多信息，请查看文章单分子研究最好的探测器是什么？

哦，H-K等人。（2019）在横向流动免疫测定（FRET-LFI）毒素11（5），292上使用荧光共振能量转移的快速简单地检测Ochratoxin A.https://doi.org/10.3390/toxins11050292
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